實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
產(chǎn)品名稱
實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
管理類別
第三類
型號規(guī)格
QuantStudioTM 1,QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5
結(jié)構(gòu)及組成/主要組成成分
該產(chǎn)品由LED、熱循環(huán)模塊、加熱蓋、電動抽屜（QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5）或手動抽屜（QuantStudioTM 1）、激發(fā)和發(fā)射濾光輪、光學(xué)盒、LCD顯示器和觸摸屏、集成計算機、電源和軟件（桌面軟件版本：1.6，QuantStudioTM 3,QuantStudioTM 5儀器固件版本：1.4， QuantStudioTM 1儀器固件版本1.1）組成。
適用范圍/預(yù)期用途
該產(chǎn)品基于熒光標(biāo)記的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）原理，與配套的檢測試劑共同使用，在臨床上用于對來源于人體樣本中的靶核酸進行定性或定量檢測，包括人類基因檢測項目和病原體核酸檢測項目。
（一） 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument
實時熒光定量pcr儀，由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設(shè)備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析。實時設(shè)備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常化后可以設(shè)定域值水平，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。
（二） 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument設(shè)備簡介
實時熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件，構(gòu)成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統(tǒng)。
優(yōu)勢編輯 播報
樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值（限制點的循環(huán)數(shù)）。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴增效率為大，這樣可以獲得準(zhǔn)確，可重復(fù)性的數(shù)據(jù)。如果同時擴增的還有標(biāo)有相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，線性回歸分析將產(chǎn)生一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。
（三） 實時熒光定量PCR儀Real-Time PCR Instrument技術(shù)原理
所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）在90年代早期，TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。（2）此后熒光雙標(biāo)記探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴增產(chǎn)物，因此用此終點法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關(guān)的熒光信號，隨著反應(yīng)時間的進行，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應(yīng)早期，產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別，而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和終的平臺期，因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點 上來檢測PCR產(chǎn)物的量，并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較，在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，先需設(shè)定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號 （baseline），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認(rèn)為是真正的信號，它可用于定義 樣本的域值循環(huán)數(shù)（Ct）。Ct值的含義是：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數(shù)。
更新時間：2024/11/12 13:41:15
經(jīng)營許可證號：滬寶食藥監(jiān)械經(jīng)營許20220040號
標(biāo)簽：實時熒光 實時熒光定量PCR儀 定量PCR儀
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